1. 準備工作
- 確認實驗目的:是檢測抗原還是抗體。
- 確認所需要的材料,如樣品、緩沖液、洗滌液、酶標二抗、底物等。
- 準備實驗設備,如酶標儀、洗板機、移液器、培養板等。
- 將試劑從4℃冷藏或者-20℃冷凍處取出,退冰至室溫。
2. 樣本和試劑準備
- 根據需要配置緩沖液和其他試劑。
- 準備樣品:可能需要稀釋或處理樣品以適應實驗設計。
- 預處理微孔板:如果使用預包被板,通常不需要額外處理。
3. 樣品加入
- 使用移液器準確加入樣品到微孔板的孔中。
- 添加對照樣品,包括陰性對照和陽性對照。
4. 孵化
- 按照說明書上的時間和溫度條件進行孵化。
- 有的步驟可能需要在溫育后進行洗板,去除未結合的物質。
5. 檢測
- 添加酶聯抗體和底物,對于含有酶標記的抗體或者抗原進行檢測。
- 再次孵化,允許底物與酶反應,產生顏色變化或發光。
6. 結果讀取
- 使用酶標儀讀取各孔顏色變化的強度,測定吸光度(OD值)。
- 結果通常與對照曲線相比較,以確定樣品中的目標分子濃度。
7. 結果分析
- 將數據記錄下來,并使用適當的軟件進行分析。
- 根據制造商提供的標準曲線計算樣品中的抗原或抗體濃度。
8. 清理和維護
- 遵照生物安全規定處理微孔板和其他試驗材料。
- 清潔實驗設備和工作區域,為下次實驗做好準備。
注意事項:
- 仔細閱讀試劑盒說明,在實驗前進行必要的準備。
- 嚴格按照說明操作,避免交叉污染。
- 注意試劑的有效期和存儲條件。
- 使用適當的生物安全操作規程處理樣品和廢棄物。